半岛(中国)体育·官方网站生物技术通报 7月最新上线文章（一）

　　ionone, BI）是一种重要的天然香气挥发性化合物，广泛分布于植物中，是由类胡萝卜素裂解双加紫罗兰酮生物合成的控制，以及 WRKY、NAC、ERF 和 MYB 等转录因子调控相关结构基因的表达从而影响紫罗兰酮生物合成途径中相关基因对植物叶片、花朵、果实色泽和香味的影响，以及利用基因过表达、基因沉默等基因工程技术对植物中紫罗兰酮生物合成和调控机制的更深层次的研究提供理论帮助，为改良植物花香物质、获得高产量的天然

　　VvIRT1，运用实时荧光定量 PCR 分析组织特异性表达模式及其在转录水平对不同铁素供应水平的响应特征，借助酵母异源表达系统分析其转运 Fe 2+ 的功能。从二倍体酿酒葡萄‘马瑟兰’中分离和鉴定了 1个铁调节转运蛋白 VvIRT1，系统发育树表明VvIRT1与芸香科柑橘CsIRT1和锦葵科陆地棉GhIRT1 的遗传距离较近。VvIRT1在 5年生成年树体新生根和组培幼苗根中特异表达 ；缺铁处理显著诱导了VvIRT1在组培幼苗全部组织（根、茎和叶）中表达，而高铁毒害显著抑制了VvIRT1在组培幼苗根中的表达。此外，酵母功能互补试验表明，VvIRT1 能够恢复酵母突变菌株 DEY1453 的正常生长，VvIRT1具有转运外界Fe2+ 的能力。3. 盐碱胁迫诱导的猴樟酵母cDNA文库构建及 CbP5CS 上游调控因子筛选

　　盐碱土壤环境是限制猴樟引种推广的主要因素，脯氨酸是植物适应盐碱胁迫过程中主要的渗透调节物质，筛选并鉴定出调控脯氨酸合成的转录因子对于猴樟耐盐碱分子机理研究具有重要意义半岛体育。以猴樟实生苗为材料，在水培培养基础上，采用 0 mmol/L 和 10 mmol/L 的

　　2CO3溶液分别进行处理，选取处理后第6和48小时时的根系组织，提取总 RNA，构建盐碱胁迫诱导的猴樟根系酵母 cDNA 文库 ；以猴樟根系总 DNA 为模板，克隆CbP5CS启动子序列，采用 Y1H 酵母单杂交技术筛选出与CbP5CS启动子存在互作的蛋白，并通过高通量测序技术鉴定出调控猴樟脯氨酸合成的转录因子。结果表明半岛体育，所构建的 cDNA 文库库容为 4.88×107CFU/mL，总克隆数为 9.76×107CFU，文库插入片段平均长度在 1 000 bp 左右，cDNA 片段重组率为 100%，符合酵母杂交试验的要求。克隆出的CbP5CS启动子序列长 2 012 bp，成功构建出诱饵质粒 pHIS2-CbP5CS，利用共转化方法从文库中筛选到 31 个与CbP5CS互作的 EST 序列。经酵母回转验证，31个EST序列均与CbP5CS存在互作。经 NGS 测序和 BLAST 比对搜索，获得 6 个转录因子基因，分别为锌指 CCCH 结构域蛋白 25 异构体 x1、AtbHLH104、转录因子TFIIIC、RING/FYVE/PHD 锌指超家族蛋白、GATA 型锌指转录因子家族蛋白、AtbHLH96。以上结果为进一步研究植物脯氨酸代谢响应盐碱胁迫的分子机制奠定基础。4. 小檗碱桥酶高效原核表达及生物合成 l -SLR 的研究

　　-fucosyllactose, 2-FL）是一种含量最丰富的人乳寡糖，微生物全细胞合成是生产 2-FL 的重要方法。乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）作为一种可直接用于乳制品的食品级微生物，目前还没有用于生产人乳寡糖的报道。首先，在两种常用L. lactis底盘 NZ3900 和 NZ9000 中利用含有基因fkp、futC、lacF的重组质粒 pNZ8148-2f 构建 2-FL 补救合成途径，在添加 10 g/L 岩藻糖和 5 g/L 乳糖的发酵培养基中，测得 2-FL 的摇瓶产量分别为 0.16 g/L 与 0.4 g/L，结合对二者生长状况等综合分析，选取 NZ9000 作为优势底盘。然后，在 NZ9000 中构建 2-FL 从头合成途径，利用同源重组技术并借助L. lactis中特有的敲除整合载体 pNZ5319，在敲除非必需基因upp的同时将基因manA半岛体育、manB、gmd和wcaG整合到染色体上，借助载体 pNZ8148-1 将基因manC、futC和lacF以质粒的形式引入到细胞中，同时利用不同启动子P32、Pnis对酶的表达水平进行组合调控。获得最优菌株NZ9000 6，在添加 20 g/L 葡萄糖和 5 g/L 乳糖的发酵培养基中，测得 2-FL 的摇瓶产量为 0.28 g/L。最后，在发酵培养基中对氯化高铁血红素、胰蛋白胨和酵母粉的浓度进行了优化，在添加 2.5μg/mL 氯化高铁血红素、15 g/L 胰蛋白胨、6 g/L 酵母粉时 2-FL 的摇瓶产量达到 1.58 g/L，为相关报道的较高水平。该研究证实了L. lactis合成 2-FL 的可行性，为 2-FL 的生产提供了新思路。

　　中文核心期刊、中国科技核心期刊，入选CSCD核心库、RCCSE核心，“百种中国杰出学术期刊” “中国精品科技期刊” “中国科技期刊卓越计划”入选期刊。投稿网站： 半岛(中国)体育·官方网站生物技术通报 7月最新上线文章（一）